Комбинация каннабиноидов,ТГК и КБД облегчает экспериментальный рассеянный склероз за счет подавления нейровоспаления.

Рассеянный склероз (РС) – хроническое инвалидизирующее заболевание центральной нервной системы (ЦНС), характеризующееся нейровоспалением, приводящим к демиелинизации. Недавно комбинация Δ9-тетрагидроканнабинола (THC) и каннабидиола (CBD), извлеченная из каннабиса, была одобрена во многих частях мира для лечения спастичности, связанной с РС. Было также показано, что комбинация THC + CBD подавляет нейровоспаление, хотя механизмы еще предстоит выяснить. В текущем исследовании мы демонстрируем, что комбинированная терапия THC + CBD (10 мг / кг каждая), но не только THC или CBD, ослабляет экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (EAE) мышей за счет уменьшения нейровоспаления и подавления клеток Th17 и Th1. Эти эффекты были опосредованы рецепторами CB1 и CB2, поскольку THC + CBD не смог улучшить EAE у мышей, дефицитных по CB1 и CB2. Лечение THC + CBD также вызывало снижение уровней инфильтрирующих в мозг CD4 + Т-клеток и провоспалительных молекул (IL-17, INF-γ, TNF-α, IL-1β, IL-6 и TBX21) при одновременном повышении уровня антибиотиков. -воспалительный фенотип, такой как FoxP3, STAT5b, IL-4, IL-10 и TGF-β. Кроме того, клетки, полученные из мозга, показали повышенный апоптоз вместе со сниженным процентом в фазе G0 / G1 с повышенным процентом в фазе G2 / M клеточного цикла. Анализ микроматрицы miRNA CD4 + T-клеток головного мозга показал, что обработка THC + CBD значительно подавляла miR-21a-5p, miR-31-5p, miR-122-5p, miR-146a-5p, miR-150-5p, miR-155-5p и miR-27b-5p при повышающей регуляции miR-706-5p и miR-7116. Анализ пути показал, что большинство подавляемых miR-нацеленных молекул, участвующих в остановке цикла и апоптоза, таких как CDKN2A, BCL2L11 и CCNG1, а также противовоспалительные молекулы, такие как SOCS1 и FoxP3. Кроме того, исследования трансфекции с участием miR-21 и использованияМыши Mir21 ^{– / –} предположили, что хотя эта miR играет критическую роль в EAE, дополнительные miR также могут участвовать в THC + CBD-опосредованном ослаблении EAE. В совокупности это исследование предполагает, что комбинация THC + CBD подавляет нейровоспаление и ослабляет клиническое развитие EAE, и что этот эффект связан с изменениями профиля miRNA в инфильтрирующих мозг клетках.

Каннабиноиды, извлеченные из марихуаны ( Cannabis sativa ), а также синтетические формы хорошо известны своими противовоспалительными свойствами ( 8 ). Также было показано, что каннабиноиды уменьшают спастичность и невропатическую боль у пациентов с рассеянным склерозом ( 9 , 10 ). Именно по этой причине комбинация Δ9-тетрагидроканнабинола (THC) и каннабидиола (CBD) была одобрена в качестве лекарственного средства (Sativex) в нескольких странах, включая Европу, Австралию и Канаду ( 11 ). Комбинация THC и CBD была недавно протестирована на животных моделях рассеянного склероза, и было обнаружено, что она подавляет нейровоспаление ( 12 , 13). Однако точные механизмы, такие как роль miRNA, в эффективности такого комбинированного лечения еще предстоит выяснить. THC хорошо известен своими психоактивными свойствами. Он действует через рецепторы CB1, преимущественно экспрессируемые в ЦНС, и CB2, экспрессируемые преимущественно на иммунных клетках ( 14 ). Наша лаборатория и другие показали, что THC повышает противовоспалительное и уменьшает провоспалительных цитокинов (производство 15 – 18 ). ТГК также опосредует апоптоз при воспалении, управляемом Т-клетками, увеличивает количество рецепторов FoxP3 + за счет индукции миРНК и эпигенетических модификаций ( 16 , 17). С другой стороны, CBD – это непсихоактивный фитоканнабиноид, который также обладает противовоспалительными свойствами ( 19 ). CBD был недавно одобрен FDA США в качестве препарата для лечения эпилепсии ( 14 ). В отличие от THC, CBD не связывает и не активирует рецепторы CB1 и CB2, но может действовать как отрицательный аллостерический модулятор рецепторов CB ( 20 ). Кроме того , CBD , как было показано , чтобы активировать другие рецепторы , такие как GPR55, TRPV1 или 5-НТ1А ( 21 – 23 ). Таким образом, возможно, что комбинация THC + CBD может быть более эффективной при лечении воспаления, воздействуя на рецепторы каннабиноидов CB1 и CB2, а также на другие потенциальные рецепторы, такие как GPR55, TRPV1 или 5-HT1a.

МикроРНК (miRNA, miR) представляют собой класс коротких некодирующих одноцепочечных РНК длиной 19-24 нуклеотидов, участвующих в посттранскрипционной регуляции экспрессии генов ( 3 , 24 , 25 ). MiRNA играют свою регулирующую роль, когда они связываются в 3′-нетранслируемую область (UTR) мРНК-мишени, в конечном итоге вызывая подавление трансляции за счет деградации или секвестрации мРНК ( 26 ). Несколько исследований выявили участие циркулирующих миРНК в физиологических и патологических процессах и идентифицировали их как потенциальные биомаркеры, терапевтические агенты или мишени для лекарств ( 27). Было обнаружено, что многочисленные миРНК дифференциально экспрессируются у пациентов с РС по сравнению с контрольной группой и могут использоваться в качестве диагностических биомаркеров или предикторов лекарственного ответа ( 28 ). Кроме того, недавние исследования показали решающую роль специфических miRNAs в контроле дифференцировки олигодендроцитов (OL) и миелинизации ( 29 ). Нарушение регуляции miRNA вносит вклад в патогенез демиелинизирующих заболеваний ( 30 ). Более того, новые патенты на miRNA также обеспечивают новые стратегии генной терапии и разработки miRNA-лекарств для демиелинизирующих заболеваний, особенно MS ( 31 ). Наша лаборатория ранее показала, что каннабиноиды могут подавлять воспаление на периферии за счет регуляции miRNA ( 3 ,15 , 32 ). Однако, могут ли каннабиноиды изменять экспрессию miR в инфильтрирующих мозг клетках во время EAE и вносят ли такие miRs вклад в подавление нейровоспаления, не исследовалось. В текущем исследовании мы использовали комбинацию каннабиноидов, THC и CBD, чтобы изучить потенциальную способность этих компонентов улучшать симптомы и прогрессирование заболевания на модели EAE, мышиной модели MS.

Мы впервые демонстрируем, что нейропротекторные и противовоспалительные свойства THC + CBD можно объяснить их способностью вызывать остановку клеточного цикла и апоптоз в активированных Т-клетках, а также переключение цитокинов с провоспалительных на противовоспалительные. через измененную экспрессию miRNA.

Комбинация THC + CBD использовалась для лечения человеческого MS ( 37 ). Известно, что это лечение снижает не только мышечную спастичность, но и подавляет нейровоспаление ( 12 , 13 ). Для дальнейшего изучения механизмов подавления нейровоспаления мы использовали мышиную модель EAE. Мышей ежедневно лечили только THC (10 мг / кг), только CBD (10 мг / кг) или комбинацией THC + CBD (10 мг / кг каждая), начиная с 8-10 дней после иммунизации MOG (Рисунок 1A). Использование CFA + PTX в качестве контроля не вызывало каких-либо клинических признаков паралича, и, кроме того, лечение этих мышей каннабиноидами не имело никакого эффекта, тем самым показывая, что последующие исследования, сообщавшие о развитии EAE с использованием MOG, были антиген-специфичными (Рисунок 1B). Таким образом, во всех последующих экспериментах мы использовали CFA + PTX + MOG для индукции EAE и изучали эффект каннабиноидов. Комбинированное лечение THC + CBD привело к ослаблению клинических симптомов EAE по сравнению с мышами, получавшими носитель (VEH) (Рисунки 1C, D). Кроме того, лечение только THC или CBD в испытанных дозах не привело к значительному подавлению клинических симптомов. На 14 день клинические показатели были значительно снижены только в группе THC + CBD, но не в группах только THC или CBD (Рисунок 1D). Эти результаты показали, что комбинация THC + CBD была эффективной для лечения мышей с EAE. Основываясь на этих данных, мы сосредоточили наши последующие исследования только на комбинированном лечении. Таким образом, продление эксперимента до дня 27 продемонстрировало, что лечение THC + CBD было высокоэффективным в долгосрочной перспективе для уменьшения клинических признаков EAE (Рисунки 1E, F).

Затем мы выполнили гистологический анализ тканей спинного мозга, взятых на 15 день. Ткани спинного мозга мышей EAE + VEH показали повышенную клеточную инфильтрацию по сравнению с мышами Naïve при окрашивании H&E (Рисунок 1G). Кроме того, обширная демиелинизация наблюдалась в области белого вещества с окрашиванием LFB у мышей EAE + VEH по сравнению с наивными мышами (Рисунок 1G). И клеточная инфильтрация, и демиелинизация были снижены в ткани спинного мозга мышей EAE + (THC + CBD) (Рисунок 1F). Чтобы проверить роль рецепторов CB1 и CB2 в нашей модели, мы индуцировали EAE как у мышей дикого типа (WT), так и у мышей с двойным нокаутом CB1 ^{– / –} CB2 ^{– / –} , а затем обрабатывали THC + CBD. Отсутствие каннабиноидных рецепторов привело к неспособности THC + CBD снизить клинические баллы EAE (Рисунки 1H, I).

Супернатанты клеточных культур выделяли из дренирующих клеток iLN, выделенных на пике заболевания. Клетки культивировали при эквивалентной клеточной плотности в течение 24 часов, и супернатанты оценивали на провоспалительные цитокины Th17 и Th1, IL-17A и IFNγ, соответственно. Обработка THC + CBD снижает выработку IL-17A и IFNγ в iLN (Рисунок 2A). Кроме того, анализ проточной цитометрии энцефалитогенных мононуклеарных клеток (MNC), выделенных из ткани мозга, показал снижение популяций общих MNC, CD3 + T-клеток и CD3 + CD4 + Th-клеток в группе EAE + (THC + CBD) по сравнению с другими экспериментальными группы (Рисунки 2B, C). Использование мышей с двойным нокаутом CB1 ^{– / –} CB2 ^{– / –} показало, что эффект THC + CBD в снижении нейровоспаления опосредован этими каннабиноидными рецепторами (Рисунки 2B, C), потому что THC + CBD был неэффективен у этих мышей.

Обсуждение

РС – это иммуноопосредованное воспалительное заболевание ЦНС ( 41 , 42 ). Точные механизмы патогенеза РС остаются неизвестными, хотя считается, что экологические, а также генетические компоненты участвуют в этом демиелинизирующем заболевании ( 43 ). Современные методы лечения РС часто состоят из иммунодепрессантов со многими побочными эффектами после длительного использования. Недавно комбинация THC + CBD, извлеченная из растения каннабис, под названием Sativex, была одобрена для лечения рассеянного склероза в более чем 28 странах, включая Европу и Канаду, для улучшения мышечной спастичности ( 37 , 44 ). Поскольку каннабиноиды, такие как THC и CBD, также являются мощными противовоспалительными средствами ( 15 , 17), остается возможность, что THC + CBD может также подавлять нейровоспаление у пациентов с РС. Фактически, есть доказательства, подтверждающие это представление на животных моделях EAE ( 12 , 13 ), что также было подтверждено в текущем исследовании. Таким образом, хотя каннабиноиды могут помочь улучшить мышечную спастичность и ослабить нейровоспаление, основные механизмы еще предстоит выяснить. В текущем исследовании мы исследовали роль miRNA в ослаблении EAE комбинацией каннабиноидов, THC и CBD. Наши исследования идентифицировали несколько miR в МНК головного мозга, которые нацелены на воспалительные пути, приводящие к снижению экспрессии воспалительных цитокинов, а также способствуют остановке клеточного цикла и апоптозу в энцефалитогенных Т-клетках мозга. MiRs также способствовали Tregs посредством индукции FoxP3.

Ранее мы показали, что miRNA играет критическую роль в каннабиноидном подавлении воспаления. В модели гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) мы отметили, что ТГК подавлял дифференцировку клеток Th17 посредством подавления экспрессии miR-21, что индуцировало SMAD7, следовательно, подавляя Th17 ( 16). THC также вызывает подавление активности miR-29b, ингибитора IFN-γ. Обработка THC полностью изменила эту дисрегуляцию miR. Кроме того, когда мы трансфицировали первичные клетки от мышей DTH ингибитором miR-21 или миметиком miR-29b, наблюдалось увеличение SMAD7 и снижение экспрессии IFN-γ соответственно. В текущем исследовании мы наблюдали подавление активности miR-155 у мышей EAE, получавших THC + CBD. Недавние исследования были сосредоточены на участии miR-155 в EAE. miR-155 опосредует воспалительный ответ, способствуя развитию воспалительных клеток Th1 и Th17. Кроме того, miR-155 участвует в ингибировании белка-супрессора передачи сигналов цитокинов 1 (SOCS1) в активированных CD4 + Т-клетках ( 45 ). Мыши, лишенные miR-155 (mir-155 – / -) снизили тяжесть заболевания EAE, сопровождаемое меньшим воспалением ЦНС и уменьшением ответов Th1 и Th17 ( 45 ). Кроме того, в текущем исследовании мы также отметили, что лечение каннабиноидами привело к подавлению регуляции miR-31, нацеленной на FoxP3. Это согласуется с предыдущими данными о том, что miR-31 нацелен на Foxp3 и недостаточно экспрессируется в природных Treg человека ( 46 ). Также было показано, что условная делеция miR-31 приводит к увеличению периферических Treg и снижению тяжести EAE ( 47 ).

Помимо нацеливания на Treg и клетки Th17, мы также идентифицировали некоторые miR, которые нацелены на клеточный цикл и апоптотические пути. Исследования в нашей лаборатории показали, что ТГК и КБД при индивидуальном тестировании могут вызывать апоптоз в иммунных клетках, а также в некоторых линиях раковых клеток ( 21 , 48 – 51).). Однако роль miRNA в регуляции каннабиноид-опосредованного апоптоза в иммунных клетках не совсем понятна, особенно в отношении MNC, выделенных из мозга во время нейровоспаления. В текущем исследовании мы отметили, что лечение THC + CBD привело к значительному увеличению апоптоза в MNC головного мозга, что также показало снижение фазы G0 / G1 клеточного цикла и увеличение фазы G2M. Наши результаты продемонстрировали, что обработка THC + CBD вызвала подавление некоторых miRNA, таких как miR-122-5p и miR-21a-5p, которые могут нацеливаться на гены, которые регулируют остановку клеточного цикла и апоптоз, такие как Bcl2L11, CCNG1 и CDKN2A., которые, как было обнаружено, были активированы. Более того, лечение THC + CBD привело к активации miRNA, таких как miR-706-5p. Сообщалось, что miR-706-5p влияет на экспрессию 4-го гена, связанного с циклом клеточного деления, Cdca4 , гена, который важен для прохождения фазы G1 клеточного цикла, в частности, через путь белка E2F / ретинобластомы ( 52 ). Кроме того, miR-706-5p подавляет активность Cacul1 , белка, связанного с клеточным циклом, способного стимулировать пролиферацию клеток за счет активации CDK2 при фазовом переходе G1 / S ( 53 ).

Хотя лечение THC + CBD привело к изменениям во многих miRNA, мы дополнительно сосредоточили наши исследования на miR-21. Мы наблюдали, что мыши Mir21 – / – были более устойчивы к EAE по сравнению с мышами WT; эти данные свидетельствуют о том, что miR-21 действительно играет критическую роль в EAE. Эти данные согласуются с предыдущими исследованиями, показывающими, что дефицит miR-21 приводит к повышенной устойчивости к EAE ( 54 ). Однако, когда мы лечили Мир21 – / -мышей с THC + CBD, мы обнаружили, что эти мыши демонстрировали дальнейшее снижение EAE, тем самым предполагая, что дополнительные miRNAs также могут участвовать в эффективности каннабиноидов для подавления EAE. miR-21 может играть важную роль в аутоиммунных заболеваниях, опосредованных клетками Th17, на что указывает тот факт, что его экспрессия повышена в клетках Th17 ( 54 ). miR-21 способствует дифференцировке клеток Th17 путем истощения SMAD-7, негативного регулятора передачи сигналов TGF-β ( 54 ). Также было показано, что miR-21 действует как вышестоящий регулятор IL-10, в частности как негативный регулятор продуцирующих IL-10 регуляторных клеток B (IL-10 + Breg), которые способствуют толерантности при аутоиммунных заболеваниях ( 55 ). Таким образом, подавление miR-21 приводит к усилению дифференцировки IL-10.+ Breg, которые ослабляют EAE. Эти результаты были также подтверждены в другой модели, в которой было показано, что специфическое молчание miR-21 in vivo значительно продлевает выживаемость аллотрансплантата, что было связано с уменьшением количества клеток Th17 и увеличением IL-10 + Breg ( 56 ). Способность miR-21 нацеливаться на IL-10 и Il-17 также согласуется с наблюдением, сделанным в текущем исследовании, о значительном подавлении miR-21 после лечения каннабиноидами и повышении регуляции IL-10 и снижении -регуляция IL-17 в CD4 + Т-клетках головного мозга. Таким образом, miR-21 может действовать, подавляя Th17, индуцируя IL-10, тем самым ослабляя EAE.

Хорошо известно, что THC действует через рецепторы CB1 и CB2, в то время как CBD не связывается с этими рецепторами или связывается с очень низким сродством, но in vivo может действовать через другие рецепторы, такие как GPR55, TRPV1, 5-HT1a или PPAR-γ. ( 13 , 21 – 23 , 57 ). Тем не менее, CBD может изменять поглощение и распад эндоканнабиноидов, тем самым косвенно влияя на активацию рецепторов CB, или может опосредовать антагонизм CB1 ( 58 , 59 ). Еще один интересный путь, с помощью которого CBD может помочь подавить нейровоспаление, – это активация аденозиновых рецепторов A 2A ( 60). Было показано, что CBD ослабляет вирусную мышиную модель рассеянного склероза, уменьшая трансмиграцию лейкоцитов крови за счет подавления хемокинов и цитокинов ( 61 ). В этом исследовании использование антагониста A 2A блокировало некоторые противовоспалительные эффекты CBD, тем самым демонстрируя ключевую роль, которую играет A 2A.в CBD-опосредованном подавлении воспаления. В текущем исследовании мы использовали мышей с дефицитом CB1 и CB2 и обнаружили, что у этих мышей, несущих EAE, при лечении THC + CBD не наблюдалось улучшения EAE, что предполагает, что лечение THC + CBD действует через эти рецепторы. Однако эти мыши демонстрировали такие же уровни клинического заболевания, что и мыши дикого типа. Это может быть связано с тем, что они могут проявлять некоторые компенсаторные механизмы или что эндоканнабиноиды в отсутствие CB1 и CB2 могут действовать на другие рецепторы, такие как ваниллоидные рецепторы ( 62). Насколько нам известно, ранее не проводилось исследований использования таких мышей с двойным нокаутом при EAE. Однако использование мышей с дефицитом только CB1 или CB2 предоставило доказательства участия этих рецепторов и эндоканнабноидов в EAE. Например, мыши с дефицитом рецептора CB1 показали более тяжелое клиническое течение, указывающее на то, что эндогенные каннабиноиды активируют CB1, который помогает контролировать нейровоспаление и EAE ( 63 ). Кроме того, было показано, что мыши с нокаутом CB2 демонстрируют обострение ЕАЕ. Однако фармакологический агонизм или антагонизм CB2 не повлиял на EAE у мышей ABH ( 64 ). Такие исследования вызвали некоторую озабоченность по поводу трансляционной ценности некоторых исследований нокаута трансгенов / генов, которые могут зависеть от генетического фона восприимчивости ( 65). Кроме того, у мышей с нокаутом может быть разная микробиота, которая может влиять на EAE, как показали наши исследования на мышах с делецией CD44 ( 66 ). Таким образом, очевидно, что необходимы дополнительные исследования по использованию мышей, нокаутированных по рецепторам CB, для понимания роли каннабиноидов в EAE.

В текущем исследовании противовоспалительные свойства THC + CBD были очевидны в их способности снижать экспрессию провоспалительных цитокинов (IL-17A, IL-6, TNF-α, IFNγ и IL-1β), индуцированных в EAE. Также Chalah MA et al. обнаружили, что провоспалительные цитокины IL-6, TNF-α и IFNγ связаны с утомляемостью от рассеянного склероза, которая является одним из отдельных симптомов, от которых страдают пациенты с рассеянным склерозом ( 67 ). фактор, контролирующий экспрессию отличительного цитокина Th1, IFN-γ ( 68). В нашем исследовании мы обнаружили, что его экспрессия подавлялась вместе с другими факторами транскрипции цитокинов IL-17A, IL-6 и TNF-α после лечения THC + CBD, что демонстрирует подавляющую воспалительную роль каннабиноидов. Повышенная экспрессия GATA-3 играет важную роль в увеличении продукции IL-4 в дифференцированном Th2 и ингибировании дифференцировки Th1 ( 69 ). С другой стороны, мы также обнаружили, что каннабиноиды увеличивают экспрессию противовоспалительных цитокинов (IL-10 и TGF-β). Сообщалось, что дефицит или аномальная экспрессия IL-10 может усиливать воспалительную реакцию на микробное заражение, но также приводит к развитию воспалительных заболеваний кишечника (ВЗК) и некоторых аутоиммунных заболеваний ( 70 , 71). В целом, наши данные согласуются с ранее опубликованными исследованиями, демонстрирующими, что каннабиноиды подавляют выработку цитокинов и способствуют Th2 при подавлении клеток Th1 ( 16 , 72 , 73 ). Наши предыдущие исследования также выявили механизмы, с помощью которых каннабиноиды, такие как ТГК, подавляют выработку цитокинов. Один из механизмов включает эпигенетические модификации, при которых лечение THC приводит к ассоциации активных сигналов модификации гистонов с генами цитокинов Th2 и сигналов супрессивной модификации с генами цитокинов Th1, что приводит к переключению с Th1 на Th2 ( 74 ).

В то время как текущее исследование выявило новые пути miRNA, с помощью которых каннабиноиды подавляют нейровоспаление и ослабляют EAE, эти исследования имеют некоторые ограничения: (1) Примечательно, что в текущем исследовании, хотя мы использовали комбинацию THC и CBD, это были чистые соединения. , тогда как в Sativex экстракт THC + CBD из каннабисатакже включает низкие уровни потенциально других второстепенных фитоканнабиноидов и терпенов, которые могут усиливать эффекты THC + CBD, называемые эффектом «антуража». Таким образом, этот вывод представляет собой ограничение при сравнении наших исследований с Sativex. Тем не менее, наши исследования также демонстрируют, что чистые формы THC + CBD также могут служить терапевтическим средством при лечении рассеянного склероза. (2) В текущем исследовании мы наблюдали, что CBD или THC при введении отдельно в дозе 10 мг / кг не подавляли клинические показатели при MOG-индуцированном EAE. В предыдущем исследовании мы обнаружили, что доза CBD 20 мг / кг была необходима для ослабления клинических признаков EAE ( 15 ). Наши пилотные исследования и опубликованные данные показали, что доза КБД 20 мг / кг или выше необходима для подавления воспаления ( 15 , 23 ,57 ). Таким образом, в текущем исследовании мы использовали субоптимальную дозу 10 мг / кг каждого из CBD и THC, чтобы проверить, будут ли они в сочетании работать синергетически и подавлять нейровоспаление. Такие исследования важны, потому что ТГК является психоактивным, и поэтому его следует использовать в минимальной эффективной дозе, и дополнительно полезно, если этот эффект может быть усилен присутствием непсихоактивного CBD, тем самым делая комбинацию клинически значимой. Существует ограниченное количество исследований ТГК, а доза и эффективность могут зависеть от модели EAE, его использования в качестве профилактической или лечебной меры, используемой модели штамма / вида и т. Д. ( 75). Тем не менее, в нашем текущем исследовании с использованием каннабиноидов после начала заболевания мы обнаружили, что однократная доза CBD или THC в дозе 10 мг / кг была неэффективной, в то время как их комбинация была высокоэффективной в подавлении клинических симптомов и нейровоспаления при EAE. Следует отметить, что в предыдущем исследовании авторы лечили мышей ЕАЕ ТГК (20 мг / кг), КБД (20 мг / кг) или ТГК + КБД (10 мг / кг каждое) ежедневно с того дня, когда появились симптомы. до первого рецидива болезни и обнаружили, что три лечения задерживают появление симптомов ( 12 ). Однако только THC + CBD или только THC смогли ослабить неврологическую инвалидность, в то время как CBD не помог ( 12). Разница между этим исследованием и текущим исследованием заключается в том, что мы использовали более низкие дозы только THC или CBD (10 мг / кг) и лечили мышей в течение гораздо более короткого периода. Причина дизайна нашего исследования заключалась в том, чтобы идентифицировать miRNA, которая будет индуцироваться на ранней стадии, и охарактеризовать их. Таким образом, возможно, что если бы мы продолжали лечение только CBD или THC на протяжении всего исследования, мы могли бы найти их эффективными. (3) В предыдущем исследовании мы отметили, что CBD в дозе 20 мг / кг может ослабить EAE (15). В текущем исследовании нашей целью было попробовать субоптимальную дозу CBD, поэтому мы использовали CBD в дозе 10 мг / кг. Обоснование использования субоптимальных доз THC и CBD состояло в том, чтобы проверить, будут ли они оказывать синергетический эффект и подавлять EAE. Следует отметить, что в более раннем исследовании76 ) .Причина несоответствия между предыдущим исследованием и нашим исследованием в отношении дозы может быть связана с тем, что авторы использовали только CFA + MOG для запуска EAE ( 76 ), в то время как мы использовали PTX + CFA + MOG. PTX, как известно, усиливает индукцию EAE, способствуя устойчивому ответу Th1 и Th17 ( 77 ). Это также очевидно из клинических баллов, поскольку в предыдущем исследовании максимальные клинические баллы ЕАЕ в контроле составляли около 2,5 ( 76 ), в то время как с PTX мы получаем максимальные клинические баллы около 4,0 у контрольных мышей, как видно из нашего текущего и прошлых исследований. ( 15 ). Кроме того, в нашей модели мы видим самые ранние признаки EAE примерно на 10 день, тогда как в предыдущем исследовании ( 76), первые признаки ЕАЕ наблюдались примерно на 18-й день. Таким образом, эти наблюдения предполагают, что более низкие дозы КБД (5 мг / кг) могут быть эффективны в менее тяжелой модели ЕАЕ, в которой не используется PTX, тогда как более высокие дозы CBD (20 мг / кг) может быть необходим в моделях EAE, индуцированных PTX, где тяжесть заболевания высока. (4) Наконец, доза ТГК, используемая в нашем исследовании, находится в пределах диапазона, используемого для людей. Основываясь на рекомендациях FDA по нормализации площади поверхности тела, доза ТГК 10 мг / кг для мышей преобразуется в 30 мг / м 2 . У людей ТГК (маринол), используемый в качестве противорвотного средства, рекомендован FDA в дозе 90 мг / м 2 / день, что в 3 раза выше, чем у мышей.

В заключение, текущее исследование делает несколько новых наблюдений, которые оказывают трансляционное влияние на лечение пациентов с РС и другими нейровоспалительными расстройствами: (1) Комбинированная терапия ТГК + КБД в настоящее время используется для лечения пациентов с РС для снижения мышечной спастичности. Наши исследования показывают, что такая комбинация также может подавлять нейровоспаление. Таким образом, необходимы дополнительные клинические исследования, чтобы проверить это открытие с различными дозами каннабиноидов. Было бы полезно определить минимальную эффективную дозу THC вместе с CBD, чтобы предотвратить чрезмерные психотропные эффекты THC. (2) В текущем исследовании каннабиноиды использовались для идентификации нескольких микроРНК, которые проявляют измененную экспрессию в инфильтрирующих мозг клетках во время EAE, которые подавляют воспаление. Эти miR нацелены на воспалительные цитокины, пути апоптоза и способствуют развитию Treg, нацеливаясь на FoxP3. Таким образом, наши исследования предоставляют полезную информацию при лечении других нейродегенеративных заболеваний, вызванных хроническим нейровоспалением. (3) Выявленные miR служат новыми потенциальными мишенями для лечения РС. Несколько miR-направленных терапевтических средств достигли клинической разработки (78 ), и, таким образом, подавление miR, таких как miR-21, может обеспечить терапевтический путь для лечения РС.

источник ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6712515/

The post Комбинация каннабиноидов,ТГК и КБД облегчает экспериментальный рассеянный склероз за счет подавления нейровоспаления. first appeared on SG35 - Журнал новости рассеянного склероза.